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細(xì)胞株是實(shí)驗(yàn)中非常常用的一個(gè)細(xì)胞,在生物制藥中使用也非常廣泛。細(xì)胞株培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單,貼壁強(qiáng)度適中,比較容易轉(zhuǎn)染,很適合用它來(lái)研究一般哺乳動(dòng)物基因的功能。建立細(xì)胞株需要組織來(lái)源,再是細(xì)胞生物學(xué)的檢測(cè),zui后還要培養(yǎng)條件和方法。首先,應(yīng)說(shuō)明細(xì)胞供體所屬物種,來(lái)自人體,動(dòng)物或其它;供體的年齡、性別、取材的器官或組織;如系腫瘤組織,應(yīng)說(shuō)明臨床病理診斷,組織來(lái)源,以及病例號(hào)等。再是了解細(xì)胞一般和特殊的生物學(xué)性狀,如細(xì)胞的一般形態(tài)、特異結(jié)構(gòu)、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和分裂指數(shù)、倍增時(shí)間、接種率;特異...
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通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為細(xì)胞株。細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。文獻(xiàn)定義由新鮮組織制成的細(xì)胞培養(yǎng)物稱原代細(xì)胞,這種細(xì)胞經(jīng)傳代成功后的細(xì)胞稱做細(xì)胞系,可泛指一般可能傳代的細(xì)胞,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系(所組成,這種細(xì)胞世系含有多種細(xì)胞類型。若用胰蛋白酶等將原代細(xì)胞消解分散后,再培養(yǎng)一代,稱次代培養(yǎng)。這個(gè)就是細(xì)胞株。
2-21
細(xì)胞株,對(duì)于不熟悉它的人來(lái)說(shuō)沒(méi)什么,但了解它的人就知道它的作用。實(shí)驗(yàn)中常用的一個(gè)細(xì)胞株,在生物制藥中使用也非常廣泛。細(xì)胞株培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單,貼壁強(qiáng)度適中,比較容易轉(zhuǎn)染,很適合用它來(lái)研究一般哺乳動(dòng)物基因的功能。通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為細(xì)胞株(CellStrain),也就是說(shuō),細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。它的使用要格外小心,主要還是用于實(shí)驗(yàn)室和生物學(xué)中。
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PCR儀,中文是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),其實(shí)是一種DNA的快速擴(kuò)增技術(shù),其擴(kuò)增效率之高就象核裂變的“鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”那樣。PCR技術(shù)有以下幾個(gè)特點(diǎn):一是被擴(kuò)增的DNA所需量極小,理論上講一個(gè)分子就可以用于擴(kuò)增了;二是擴(kuò)增效率高,目的基因的量成指數(shù)形式擴(kuò)增,幾個(gè)小時(shí)就擴(kuò)增1000萬(wàn)倍以上?,F(xiàn)在PCR技術(shù)已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于生命科學(xué)研究、食品衛(wèi)生、醫(yī)療、法醫(yī)及環(huán)境監(jiān)測(cè)等諸多方面。
2-4
我們知道PCR儀有普通PCR儀和實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,還有種梯度PCR儀。梯度PCR儀把一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件,溫度梯度,通常有12種溫度梯度,這樣的儀器就叫梯度PCR儀。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同DNA片段,其zui適退火溫度事不同,通過(guò)設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,從而一次性PCR擴(kuò)增,就可以篩選出表達(dá)量高的zui適退火溫度,進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,這樣節(jié)約成本的同時(shí)也節(jié)約了時(shí)間。主要用于科研,教學(xué)機(jī)構(gòu)。梯度PCR儀,在不...
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除了有普通的PCR儀外,還有種實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),就成了熒光定量PCR儀。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同,只是PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。這個(gè)PCR儀叫做實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。熒光定量PCR儀有單通道,雙通道,和多通道。當(dāng)只用一種熒光...
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PCR儀利用升溫使DNA變性,用限制性內(nèi)切酶使DNA雙鏈解鏈,在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈,進(jìn)而達(dá)到基因復(fù)制的目的。PCR儀可以分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等幾類。普通PCR儀一般把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運(yùn)行。主要是用作簡(jiǎn)單的,對(duì)目的基因退火溫度的擴(kuò)增。它主要應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)、檢疫等。
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